Informácie

Funguje tento postup extrakcie DNA z jahôd?

Funguje tento postup extrakcie DNA z jahôd?


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Chcel som vyskúšať tento experiment na extrakciu DNA z jahôd, ktorý sa dá urobiť doma:

https://www.stevespanglerscience.com/lab/experiments/strawberry-dna/

Keď som však trochu čítal, narazil som na tento článok:

http://www.ncbe.reading.ac.uk/PRACTICALS/PDF/DNA_isolation.pdf

Uvádza sa v ňom, že „Aj keď sa zdá, že tieto ovocie [kiwi, banány a jahody] poskytujú veľké množstvo DNA, vyprodukovaná látka je v skutočnosti o niečo viac ako pektín.“

majú pravdu? Ako by ste mohli povedať, že to, čo ste extrahovali, je v skutočnosti DNA?


Protokol extrakcie opísaný v prvom článku je štandardný protokol extrakcie DNA. Variácie tejto metódy som v laboratóriu (s určitými vylepšeniami) použil na iných typoch buniek najmenej stokrát, ak nie tisíckrát. Experiment "jahoda" je veľmi populárny pri demonštráciách v triede, najmä na úrovni stredných a vysokých škôl, pretože je vizuálne zaujímavý a používa bežne dostupné činidlá. Aj keď tieto činidlá nie sú laboratórnej kvality, sú viac než dostatočné na základnú extrakciu DNA.

Nenapadá mi vedecký základ, prečo by autor v druhom článku tvrdil, že extrahovaná látka je „o niečo viac ako pektín“. Keďže neposkytol údaje ani odkaz na žiadne údaje, je ťažké vedieť, na čom zakladá svoj záver.

Je určite možné, že DNA stiahne určité množstvo bunkových proteínov počas kroku zrážania alkoholom (posledný krok). To je dôvod, prečo v laboratórnom prostredí zvyčajne vykonáte niekoľko ďalších krokov, aby ste "vyčistili" DNA a odstránili všetky spoluzrážané proteíny. To by bolo nevyhnutné, ak plánujete vykonať ďalšiu analýzu DNA, pretože proteínové kontaminanty môžu interferovať s následnými analýzami, čím sa údaje stanú nespoľahlivými. Jedinou výnimkou by bolo, ak by ste študovali interakcie proteín-DNA, ale to je samostatný typ experimentu.

Predpokladám, že tento experiment vykonajú študenti na úrovni začiatočníkov, na rozdiel od triedy vysokej školy alebo absolventa? Ak áno, potom na účely demonštrácie v triede nie sú tieto dodatočné kroky čistenia zaručené. Je to časovo náročné a bolo by to veľmi nudné sledovať... Ako je to pri väčšine laboratórnych prác. :-) Aj keď vykonáte tieto dodatočné kroky, vyčistená DNA sa často znova vyzráža alkoholom a je vizuálne podobná tomu, čo ste videli pri prvom zrážaní alkoholom, len je o niečo menej nepriehľadná. Pravdepodobne to nie je niečo, čo by si väčšina študentov všimla alebo považovala za zaujímavé.

Či tak alebo onak, je úplne presné povedať, že experiment s jahodami je extrahovaním DNA. Vždy by ste mohli vysvetliť, že na DNA sa môžu naviazať bunkové proteíny (alebo sa k nej „prilepia“) a že ak by ste chceli analyzovať DNA v laboratórnych podmienkach, bolo by potrebné vykonať niekoľko ďalších krokov, pretože proteíny by interferovali s DNA. analýza DNA. To by tiež poskytlo študentom na úrovni začiatočníkov úvod do skutočnosti, že DNA a proteíny sa navzájom ovplyvňujú.

Dúfam, že to pomôže!


Extrakcia DNA - Jahoda

Jahody sú oktoploidné, čo znamená, že majú osem sád chromozómov. Postup extrakcie DNA z jahody je jednoduchý a výsledky sú zvyčajne zrejmé, v ružovom roztoku jahodovej šťavy je ľahké vidieť biele vlákna DNA.

Pri tomto postupe rozdrvíte jahodu a pridáte saponát a soľ, aby sa rozbili bunkové steny a uvoľnila sa DNA v jadre. Tekutinu z tejto rozdrvenej jahody potom prefiltrujete do kadičky, látka sa nazýva filtrát. Filtrát sa potom naleje do skúmavky a vrch sa naleje vrstvou alkoholu. DNA sa potom vyzráža do alkoholovej vrstvy v skúmavke

  • Extrahujte DNA z jahôd pomocou produktov pre domácnosť
  • Identifikujte úlohu chemikálií v procese extrakcie DNA
  • Pozorujte veľkú vzorku DNA

Potrebné materiály:

  • DNA extrakčný pufer: 1000 ml deionizovanej vody, 50 ml čistého umývacieho prostriedku na riad, 1 čajová lyžička soli
  • Jahody (fungujú aj iné druhy ovocia)
  • Taška na zips
  • Kávové filtre a lieviky
  • Skúmavky, kadičky alebo poháre na zber filtrátu

1. Pridajte jahodu (alebo polovicu) do zásobníka Ziploc.
2. Pridajte 10 ml DNA extrakčného tlmivého roztoku a rozdrvte jahody a tlmivý roztok asi jednu minútu.
3. Pomocou lievika a kávových filtrov prefiltrujte jahodovú šťavu do kadičky.
4. Filtrát preneste do skúmavky, skúmavku by ste mali naplniť len asi do polovice a vyhnite sa prenosu peny.
5. Vrch jahodovej zmesi pomaly polejeme alebo pokvapkáme studeným alkoholom. Chcete jednu vrstvu na vrchu jahodovej zmesi.
6. Vo vrstve etanolu sa vytvoria biele pramene, na navíjanie prameňov použite miešaciu tyčinku.

Diskusné otázky

1. Ako vyzerá DNA z jahody?

2. Prečo je dôležité, aby vedci dokázali odstrániť DNA z buniek?

3. Aká je úloha detergentu, etanolu a soli v procese extrakcie?

4. Aký je rozdiel medzi filtrátom a zrazeninou?

4. Obsahuje vaše jedlo DNA? Ako vieš? Prečo vám neublíži (alebo sa nezmení) požitím DNA iného organizmu?

/>Toto dielo podlieha licencii Creative Commons Attribution-NonCommercial-ShareAlike 4.0 International License.


Experiment extrakcie DNA

DNA v skúmavke (Obrázok: Richard Newstead)

Predslov
DNA alebo Deoxyribo DeoxyriboNucleic DNA je skratka pre deoxyribonukleová kyselina je molekula kódu genetickej informácie, ktorá existuje vo väčšine živých organizmov. DNA je materiál, ktorý tvorí chromozómy a je tiež genetickou informáciou uloženou v telách živých bytostí. Táto genetická informácia v zbierke je súborom príkazov/príkazov, ktoré sú pripravené na to, aby mohli vykonávať určité veci.

Aj keď môžeme použiť všetky zdroje DNA, ale na tento experiment je lepšie použiť zdroje DNA z prísad, ako sú zelené fazuľky, špenátové listy, jahody, kuracie pečienky a banány. Nepoužívajte DNA od ľudí, ktorí žijú alebo ako domáce zvieratá.

1 100 ml zdroja DNA
2,1 ml kuchynskej soli alebo NaCl
3. 200 ml studenej vody
4. Enzýmy na zmenu vlastností bielkovín (napr. zjemňovač mäsa (papája šťava), čerstvá ananásová šťava alebo čistiace prostriedky na kontaktné šošovky)
5. 30 ml prostriedku na umývanie riadu
6. Alkohol 70-90% alebo izopropylalkohol alebo etylalkohol

Materiál
1. Miešačky
2. Mixér
3. Sito
4. Pohár alebo pohár
5. Skúmavka
6. Slamky alebo špáradlá

Postup
1. Zmiešajte všetky zložky, 100 ml zdroja DNA, 1 ml soli a 200 ml studenej vody. potom sa zmieša s mixérom a rýchlym miešaním trvajúcim viac ako 15 sekúnd, cieľom tohto procesu je získať homogénnu koncentráciu zmesi. Po tomto rozbití bunkovej steny od seba a uvoľneniu DNA v nej uloženej.

2. Prelejte kvapalinu cez filter do inej nádoby. Účelom tohto procesu je odstrániť veľké pevné častice. Kvapalina sa odstráni a tuhá látka sa vyhodí.

3. Do roztoku pridajte 30 ml tekutého čistiaceho prostriedku. Roztok miešajte alebo otočte homogénne. Tento roztok sa nechá reagovať 5 až 10 minút a potom sa pristúpi k ďalšiemu kroku.

4. Do každej fľaše alebo skúmavky pridajte trochu zmäkčovača mäsa alebo nastriekajte ananásový džús alebo čisté kontaktné viečko na šošovky. Jemne premiešajte, aby sa enzým spojil. Silné miešanie poškodí DNA a sťaží viditeľnosť v nádobe.

5. Nakloňte každú skúmavku a nalejte alkohol na obe strany skla alebo plastu, aby sa vytvorila vrstva plávajúca nad kvapalinou. Alkohol je menej hustý ako voda, takže bude plávať v tekutine, ale nechceme ho liať do tuby, lebo sa premieša. Ak preskúmame povrch medzi alkoholom a každou vzorkou, uvidíte hmotnosť bielej nite. Toto je DNA!

6. Na zachytenie a odber DNA z každej skúmavky použite drevenú alebo slamenú špíz. DNA môžete skontrolovať pomocou mikroskopu alebo lupy alebo ju vložiť do malej nádoby s alkoholom, aby ste ju uložili.

Diskusia
1. Prvým krokom v tomto experimente je výber materiálov, ktoré obsahujú veľa DNA. Hoci DNA môžeme použiť odkiaľkoľvek, zdroj vysokých rastlín v DNA bude na konci experimentu produkovať viac produktov. Ľudský genóm je diploidný, čo znamená, že obsahuje dve kópie každej molekuly DNA. Mnohé rastliny obsahujú viacero kópií svojho genetického materiálu. Napríklad jahodový oktoploid a obsahuje 8 kópií každého chromozómu.

2. Blending je proces separácie / rozpadu buniek, aby sme mohli oddeliť DNA od iných molekúl. Soľ a detergent na odstránenie proteínov sú zvyčajne viazané DNA. Čistiace prostriedky tiež oddeľujú lipidy (tuk) zo vzorky. Enzýmy používané na rezanie DNA. Prečo to chceme rezať? DNA je poskladaná a obalená okolo proteínu, takže je potrebné ju pred izolovaním uvoľniť.

3. Akonáhle sme dokončili vyššie uvedené kroky, DNA bola úspešne oddelená od ostatných bunkových zložiek, ale stále ju musíme urobiť neviditeľnou. Tu zohráva dôležitú úlohu funkcia alkoholu. Ostatné molekuly vo vzorke sa rozpustia v alkohole, ale DNA nie. Keď do roztoku nalejete alkohol (tým lepší studený), molekula DNA sa usadí, aby sme DNA mohli zbierať.


Extrakcia DNA z jahôd

Zistite, z ktorej fázy jahôd by bolo najjednoduchšie extrahovať DNA, či sú nezrelé, zrelé alebo prezreté.

Úvod:

DNAalebo deoxyribonukleová kyselina, je molekula života. DNA existuje v každom jednom organizme, od najmenšieho vírusu až po najväčšieho cicavca, a je jedinou známou molekulou, ktorá má schopnosť sa replikovať.

DNA je dlhé vlákno &ndash ako vlas &ndash len tenšie a dlhšie. Je vyrobený z dvoch prameňov, ktoré sa k sebe lepia miernym krútením. DNA je organizovaná do úsekov génov, kde sa proteíny pripájajú, aby zvili DNA do chromozómov, úsekov, ktoré „zapnú gén“ a „vypnú gén“.

Kalifornské jahody, sú rod rastlín v čeľade rosaceaea plody týchto rastlín. Existuje viac ako 20 pomenovaných druhov a mnoho hybridov a kultivarov, ale najbežnejšie komerčne pestované jahody sú kultivary záhradnej jahody. Jahody sú známe aj ako výživná &ldquosuperfood&rdquo, plná antioxidantov vrátane vitamínu C. Jedna porcia 8 stredne veľkých jahôd má iba 45 kalórií a poskytuje 140 % odporúčanej dennej dávky (RDA) vitamínu C v USA, 210 mg draslíka a takmer 3 gramy vlákniny.

Zrenie je proces v ovocí, ktorý spôsobuje, že sa stávajú poživateľnejšími. Rovnako ako u ľudí, rastlinné hormóny sú chemické zlúčeniny, ktoré pomáhajú regulovať rastové procesy. Ovocie rastie, pretože hormóny robia jeho bunkové steny pružnejšími a pružnejšími. Iné hormóny rozkladajú chlorofyl a umožňujú tak vznik jasných a príťažlivých farieb. Hormóny znižujú kyslosť šťavy a premieňajú komplexné sacharidy v tkanive na sladšie jednoduché cukry.

Materiály:

  1. 3 priemerne veľké nezrelé jahody
  2. 3 priemerne veľké zrelé jahody
  3. 3 priemerne veľké prezreté jahody
  4. ½ Pohár vody z vodovodu
  5. 2 malé, priehľadné plastové poháre
  6. 2 odmerky - 1 čajová lyžička, 1 šálka
  7. Papierové utierky (použite na sušenie iných materiálov, počet sa môže líšiť)
  8. 2 čajové lyžičky saponátu na riad
  9. 2 lyžičky soli
  10. 1 kávový filter
  11. 1/3 šálky trecieho alkoholu
  12. Drevená palička na nanuky
  13. 1 plastové vrecko

Experimentálny postup:

KROK 1: Zmiešajte kvapalinu na extrakciu DNA
  1. Vezmite 1 plastový pohár a zmiešajte 2 čajové lyžičky saponátu na riad
  2. Potom pomaly vmiešajte 1 čajovú lyžičku soli
  3. Potom odoberte ½ šálky vody a premiešajte.
KROK 2: Získajte DNA
  1. Vezmite 1 jahodu a vložte ju do plastového vrecka
  2. Rukou roztlačte jahody, kým nezostanú žiadne veľké kúsky
  3. Pridajte 2 polievkové lyžice tekutiny na extrakciu DNA
  4. Jemne krúžte drevenou tyčinkou od nanuku aspoň jednu minútu a potom nechajte postáť
KROK 3: Oddeľte tekutiny od pevných látok
  1. Vezmite kávový filter a prikryte ho cez nepoužitý plastový pohár
  2. Nalejte zmes jahôd a nechajte ju filtrovať 30 sekúnd alebo kým tekutina neprestane kvapkať
KROK 4: Extrahujte DNA
  1. Potom nalejte po strane pohára rovnaké množstvo studeného liehu, ako je tam jahodová tekutina. Nemiešajte ani nemiešajte.
  2. V priebehu niekoľkých sekúnd sledujte vývoj bielej zakalenej látky (DNA) v hornej vrstve nad vrstvou jahôd
  3. Nakloňte pohár a pomocou drevenej tyčinky na nanuky zoberte DNA a vložte ju do odmerky.
KROK 5: Zmerajte množstvo extrahovateľnej DNA
KROK 6: Opakujte proces s inými druhmi jahôd
  1. Všetky plastové poháre a iné materiály dôkladne opláchnite vodou a všetky materiály osušte papierovými utierkami, aby ste predišli kontaminácii
  2. Opakujte tento proces s ostatnými druhmi jahôd, aby ste určili, ktorý z nich je najviac extrahovateľný na získanie DNA.

Vyhlásenie a bezpečnostné opatrenia

Education.com poskytuje nápady na projekt Science Fair len na informačné účely. Education.com neposkytuje žiadnu záruku ani vyhlásenie týkajúce sa nápadov projektu Science Fair a nezodpovedá ani neručí za žiadnu stratu alebo škodu, priamo alebo nepriamo, spôsobenú vaším používaním takýchto informácií. Vstupom do Science Fair Project Ideas sa vzdávate a vzdávate akýchkoľvek nárokov voči Education.com, ktoré z toho vzniknú. Okrem toho sa na váš prístup na webovú stránku Education.com a na nápady projektu Science Fair vzťahujú Zásady ochrany osobných údajov a Podmienky používania lokality, ktoré zahŕňajú obmedzenia zodpovednosti Education.com.

Upozorňujeme, že nie všetky nápady projektu sú vhodné pre všetkých jednotlivcov alebo za každých okolností. Implementácia akéhokoľvek nápadu vedeckého projektu by sa mala uskutočňovať iba vo vhodnom prostredí a s príslušným rodičovským alebo iným dohľadom. Prečítanie a dodržiavanie bezpečnostných opatrení všetkých materiálov použitých v projekte je výhradnou zodpovednosťou každého jednotlivca. Ďalšie informácie nájdete v príručke o vedeckej bezpečnosti vášho štátu.


DNA: základné informácie

Čo znamená DNA?

DNA znamená deoxyribonukleovú kyselinu.

DNA je dlhá molekula v tvare dvojitej špirály - dvoch špirál, ktoré sa otáčajú okolo seba. Tieto špirály sú chrbtovou kosťou DNA a sú tvorené cukrami a fosfátmi. Špirály sú spojené chemikáliami známymi ako základne, ktoré sa medzi špirálami tiahnu ako priečky rebríka. DNA má štyri typy báz: adenín (A), tymín (T), guanín (G) a cytozín (C). A a T sa vždy spájajú, rovnako ako G a C.

Čo robí DNA?

Naše gény sa skladajú z DNA a DNA obsahuje náš jedinečný genetický kód.
Podobne ako kniha receptov alebo návod na lego, aj DNA obsahuje pokyny na výrobu všetkých našich bielkovín, ktoré vykonávajú všetky úlohy v našom tele.

Spoločné gény

Nevyzeráš veľmi ako mucha alebo červ. Ale verte tomu alebo nie, zdieľate gény s oboma a so všetkými ostatnými živými tvormi. Vedci študujú gény v baktériách, zebričkách a iných živých tvoroch, aby sa dozvedeli viac o ľuďoch.

Koľko DNA zdieľate s týmito živými bytosťami?


Prečo používame prostriedok na umývanie riadu?

Prostriedok na umývanie riadu roztrhne bunky jahôd a uvoľní DNA.

Prečo používame soľ?

Zabezpečuje, že proteíny v bunke sú oddelené od DNA.

Čo robí alkohol?

Keď sú molekuly nerozpustné (nedá sa rozpustiť), zhlukujú sa a stanú sa viditeľnými. DNA nie je rozpustná v alkohole, preto sa vlákna DNA zhlukujú a sú viditeľné voľným okom.


Experiment extrakcie DNA cibule

Predslov
V tomto experimente sa používa cibuľa, pretože cibuľa má nízky obsah škrobu, čo umožňuje, aby bola DNA jasne viditeľná. Soľ chráni negatívny koniec DNA fosfátu, čo umožňuje hrotu priblížiť sa, aby sa DNA mohla vyzrážať zo studeného alkoholového roztoku. Čistiace prostriedky spôsobujú rozpad bunkových membrán tým, že rozpúšťajú lipidy a proteíny z buniek a narúšajú väzby, ktoré držia bunkové membrány pohromade. Čistiace prostriedky potom vytvárajú komplexy s lipidmi a proteínmi, čo spôsobuje zrážanie roztoku Cibuľa (alium cepa)

Vybavenie a materiály
Etanol 95 %.
Teplomer
tanier.
Odmerka.
1000 ml bekaerového pohára.
Lievik.
Filter
Skúmavka
Mraznička
Horúca platňa s vaňou
Ľadová kocka.
Lyžica
Mydlo alebo šampón na umývanie riadu
Kuchynská soľ, buď jodizovaná alebo nejodidovaná
Destilovaná voda
Skvelé cibule
Mixér a nôž na krájanie cibule.
Časovač alebo hodiny

3. Pridajte destilovanú vodu do kadičky na konečný objem 100 ml. Soľ rozpustite pomalým miešaním, aby nevznikla pena.

4. Jednu veľkú cibuľu nakrájajte nožom, potom mixérom a vložte do kadičky s objemom 1000 ml


6. Vložte 1000 ml pohára roztoku DNA do horúceho vodného kúpeľa s teplotou 55-60 °C, ako je znázornené na obrázku nižšie, na 10-12 minút.

8. Chladenie zmesi vo vodnom ľadovom kúpeli, asi 4 °C, ako je znázornené na obrázku nižšie, počas 5 minút. V tomto procese pritlačte zmes cibuľovej DNA na stranu pohára lyžičkou späť. Tento krok spomaľuje poškodenie DNA.



10. Do reakčnej skúmavky odoberte približne 5 ml roztoku cibuľovej DNA. Roztoky možno pred použitím uchovávať v chladničke približne jeden deň podľa nasledujúcich krokov.

11. Z mrazničky vyberte studený 95 % roztok etanolu a pridajte ho do skúmavky tak, aby bola vrstva etanolu väčšia ako asi 1 cm (cm). Pre dosiahnutie najlepších výsledkov by mal byť etanol čo najchladnejší. Do roztoku je možné pridať etanol

12. DNA sa nerozpúšťa v etanole. Keď sa k zmesi pridá etanol, všetky zložky zmesi okrem DNA zostanú v roztoku, kým sa DNA usadí v etanolovej vrstve. Roztok sa nechá stáť 2-3 minúty, potom sa biela DNA usadí v etanolovej vrstve.



13. Vytvorená DNA sa môže odobrať zubom alebo pipetou alebo aká stopka krivého miešadla môže odobrať DNA
  • Séria laboratórnych cvičení s pokynmi na extrakciu DNA z niekoľkých rôznych východiskových materiálov. Cvičenie je určené pre ročník 6-12.

Nasledujúce zdroje boli pôvodne prístupné prostredníctvom zbierky digitálnych zdrojov BioSciEd Net (BEN), čo je cesta národnej vedeckej digitálnej knižnice (NSDL) pre vzdelávanie v oblasti biologických vied. Pre viac učebných zdrojov navštívte BEN, kde môžete použiť ich databázu s možnosťou vyhľadávania. BEN je zadarmo, ale vyžaduje registráciu.

    - Toto laboratórium od AccessExcellence umožňuje študentom konkrétne pracovať s DNA jednoduchou izoláciou chromozomálnej DNA pomocou rovnakých základných nástrojov a metód, aké používajú vedci. - táto webová stránka Science NetLinks poskytuje plány lekcií, ktoré rozvíjajú pochopenie DNA modelovaním procesu extrakcie DNA.
  • [odkaz https://web.archive.org/web/20190222033127/http://www.apsnet.org/edcenter/K-12/TeachersGuide/DNA_Easy/Pages/default.aspx 'DNA the Easy Way (a Gram Stain Without the Mess)'] – Tento zdroj od Americkej fytopatologickej spoločnosti je krátkym laboratórnym cvičením, ktoré učí študentov postupy izolácie DNA z bakteriálnych buniek. Okrem toho sa študenti naučia, ako určiť Gramovu reakciu bakteriálnych izolátov. : Tento zdroj Access Excellence poskytuje laboratórnu aktivitu, pri ktorej študenti používajú analýzu odtlačkov prstov DNA na určenie páchateľa fiktívneho zločinu. - Tento zdroj vyžaduje, aby ste sa prihlásili do BEN na zobrazenie (čo si vyžaduje predplatné BEN, ktoré je bezplatné). Tento dokument PDF ponúka podrobný manuál protokolov a inštruktážnych informácií na vykonávanie bakalárskeho laboratórneho cvičenia z molekulárnej biológie a cenetiky, v ktorom študenti využívajú polymerázovú reťazovú reakciu na vytvorenie odtlačkov DNA z vlastných vlasov. Obsahuje osnovy študentov, poznámky inštruktora a navrhované otázky pre laboratórne správy.

O

Opätovné použitie

Materiál na tejto stránke je ponúkaný pod licenciou Creative Commons, pokiaľ nie je nižšie uvedené inak.


Pomôžte financovať Monitor žurnalistiky za 11 USD mesačne

Už ste predplatiteľom? Prihlásiť sa

Monitorovanie žurnalistiky mení životy, pretože otvárame príliš malú škatuľku, o ktorej si väčšina ľudí myslí, že v nej žije. Veríme, že správy môžu a mali by rozšíriť pocit identity a možností nad rámec úzkych konvenčných očakávaní.

Naša práca nie je možná bez vašej podpory.


EXTRAKCIA DNA JAHODY

Dobre zásobená špajza vám umožní vykonávať nespočetné množstvo jednoduchých, ale fascinujúcich vedeckých experimentov a aktivít po celý mesiac!

POTREBNÉ MATERIÁLY

  • Kávové filtre
  • Pipetujte
  • Skúmavka
  • Jahody
  • Saponát na riad
  • Soľ
  • Plastové vrecká na zips
  • Natieranie alkoholu


DISKUSIA

Výťažky DNA získanej z bukálnych výterov a moču sa značne menia v závislosti od výteru alebo typu moču, jedinca, ktorému sa výter vykonáva, techniky výteru a počtu buniek zachytených na výtere a v moči. 6 , 11 Očakávaný výťažok pri použití tohto protokolu je 60� ng/μl/výter a pre odber moču 25� ng/μl/15 ml (tabuľka 1), čo je prinajmenšom faktor o dve vyššie v porovnaní s konvenčnými metódami. Výťažok a čistota izolovanej DNA tiež závisí od manipulačných postupov výskumníkov. Pokles kvality a kvantity DNA bol pozorovaný, keď materiál nebol okamžite umiestnený do bunkového lyzačného pufra na ďalšie spracovanie. Degradácia pásov DNA bola pozorovaná v bukálnych výteroch a vzorke moču spracovanej s časovým oneskorením, zatiaľ čo degradácia vo vzorke krvi a vlasov nebola pozorovaná, pravdepodobne v dôsledku povahy vzorky a rozsahu koncentrácie enzýmu nukleázy vo vzorke pred trávením. Hoci došlo k určitému stupňu degradácie DNA vo vzorkách skladovaných pri nízkej teplote počas 3 dní, táto štúdia nepreukázala žiadny významný rozdiel medzi extrahovanými produktmi PCR amplifikácie DNA z bukálnych buniek bezprostredne po odbere vzorky alebo z bukálnych buniek. zmrazené 3 dni pri �ଌ. Navyše 1 týždeň skladovania v chladničke pri 4ଌ alebo zmrazenom pri �ଌ tiež neovplyvnil výťažok extrahovanej DNA alebo PCR amplifikáciu DNA. V prípade vzoriek vlasov a krvi je možné získať vysokú kvalitu DNA pre neskoršie použitie, a to aj po uskladnení vzorky vlasov v etanole na viac ako 2 mesiace a vzorky krvi v liekovke potiahnutej EDTA na viac ako 4 mesiace pri �ଌ.

Vo všeobecnosti je pri štúdiách typizácie DNA čerstvá plná krv alebo krvou zafarbený materiál primárnym zdrojom DNA jednotlivca 𠇏ingerprint” a používa sa ako štandard na porovnanie. Tu prezentované zistenia nám umožnili demonštrovať použitie bukálnych tampónov a moču ako alternatívnych zdrojov na extrakciu DNA. Existuje však výrazný rozdiel medzi vzorkami mužského a ženského moču, pokiaľ ide o množstvo dostupnej DNA, pretože vo väčšine prípadov neexistujú žiadne informácie o pohlaví, keď sa moč odoberá z miesta činu, 10 by sa mal vždy odoberať od najväčšieho škvrny od moču, ktoré sú k dispozícii. Veľké objemy slín a moču možno odobrať neinvazívnym spôsobom bez akejkoľvek bolesti. V skutočnosti sa bukálny výter a moč dali ľahko získať s minimálnou námahou na podrobnú analýzu, dokonca aj od dojčaťa. 14 Môžeme tiež amplifikovať vírusové a bakteriálne gény z DNA moču a bukálnych výterov na štúdium prítomnosti alebo neprítomnosti akýchkoľvek patogénov pomocou opísaného testu PCR.

Izolovaná DNA zo všetkých vzoriek vytvorila produkty PCR s podobnou veľkosťou párov báz ako cieľový mitochondriálny gén. V prípade reštrikčného trávenia však produkty PCR z vlasov a krvi produkovali vynikajúce produkty štiepenia. Môže to byť skôr výsledkom prítomnosti dobrej koncentrácie produktov amplifikácie PCR a neprítomnosti akejkoľvek nečistoty vo vzorke PCR, ako vo vzorkách moču a bukálnych výterov, ktoré neboli správne štiepené reštrikčným enzýmom. Preto môžeme namiesto vzoriek krvi použiť vzorky vlasov na molekulárnu analýzu založenú na PCR-RFLP.

Existuje možnosť nízkych hladín kontaminantov, ktoré môžu byť prítomné v DNA izolovanej zo séra alebo plazmy, ktoré sú oveľa menej zastúpené ako tie, ktoré existujú vo vzorkách moču a bukálnych výterov. 15 V týchto technikách je menšie množstvo kontaminantov, takže pravdepodobnosť interferencie kontaminantov počas procesu PCR je veľmi nízka.

Harty a kol. 16 uviedli, že PCR amplifikácia bola úspešná po dlhom skladovaní vzoriek, aj keď skladovanie znížilo výťažok DNA. V tejto štúdii bola izolovaná DNA zo všetkých vzoriek uložených v zmrazenom stave pri �ଌ vhodná na neskoršie použitie. DNA extrahovaná zo vzorky moču, ktorá bola skladovaná viac ako 1 mesiac zmrazená pri �ଌ, fungovala rovnako dobre ako čerstvá vzorka moču. Hoci sa zdá, že DNA vo vzorke moču časom degraduje, vzorka moču skladovaná až 3 mesiace zmrazená pri �ଌ sa môže stále použiť na amplifikáciu PCR. Izolovaná DNA z vlasov a krvi je veľmi dobrá na základe stability DNA na uskladnenie zmrazenej pri �ଌ na ďalšiu analýzu.

Záver

Úspešný odber vzoriek a extrakcia genómovej DNA z bukálnych výterov, moču a vlasov sú neinvazívne a spoľahlivé alternatívy k pichľavému invazívnemu odberu krvi pre subjekty aj pre zberateľov vzoriek. 17 – 20 Ukázali sme tu jednoduchú a novú metódu odberu vzoriek a extrakcie DNA, ktorá je nákladovo efektívna, jednoduchá a rýchla a poskytuje dostatočné množstvo a kvalitu DNA pre analýzu na báze PCR-RFLP. Porovnanie extrakčných postupov ukazuje, že na extrakciu DNA z bukálneho výteru, moču, vlasov a vzoriek krvi je najvhodnejšia jednoduchá metóda fenol-chloroform. Za vhodných podmienok skladovania možno DNA izolovanú z bukálnych buniek, moču a vlasov úspešne použiť na vykonanie testov na báze PCR. Metóda extrakcie mtDNA s vysokým obsahom soli a aniónového detergentu vyvinutá v tejto štúdii predstavuje rýchly a jednoduchý protokol, ktorý vyniká úspešnosťou amplifikácie mtDNA štandardných techník brúsenia skla/extrakcie organickým rozpúšťadlom, ktoré v súčasnosti používajú mnohé forenzné laboratóriá. Relatívne menší počet krokov použitých v tejto metóde umožňuje kratšiu dobu trvania a navyše vedie k výrazne zníženej pravdepodobnosti kontaminácie s minimálnou stratou vzorky. Metóda chemickej digescie DTT využíva činidlá, spotrebný materiál a vybavenie ľahko dostupné v akomkoľvek základnom laboratóriu. Jeho jednoduchosť pomôže pri analýzach mtDNA v tých laboratóriách, ktoré ešte musia vykonať forenzné testovanie mtDNA, ako aj populačnú štúdiu s použitím vzoriek vlasov. Stále je však potrebné preskúmať dôležité otázky týkajúce sa výťažku a kvality ľudskej DNA, ktorú možno získať rôznymi metódami extrakcie DNA.


Pozri si video: Nepečený jahodový dort - Pavlinna 17 (Smieť 2022).


Komentáre:

  1. Yolabar

    Yes, all can be

  2. Nahuatl

    Aktuálne informácie o novinkách v stavebníctve a interiérovom dizajne: modulárna výstavba, dizajn chaty a kancelárske dekorácie. Publikácie o nových inováciách v originálnych materiáloch, odborné poradenstvo. Návody a rady pre prácu so spoľahlivými stavebnými technológiami.

  3. Clyve

    A female Windows 98 has been developed. A third has been added to the “yes” and “no” buttons: “maybe”.

  4. Jaques

    is not logical

  5. Dougul

    Bookmarked it.

  6. Zulkik

    What a necessary sentence ... great, excellent idea



Napíšte správu