Čoskoro

Separácia fragmentov DNA: gélová elektroforéza

Separácia fragmentov DNA: gélová elektroforéza


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Ako sme videli v predchádzajúcej položke, fragmenty DNA vytvorené pôsobením reštrikčných enzýmov majú rôzne veľkosti. Najčastejšie používanou technikou na separáciu fragmentov DNA je elektroforéza prostredníctvom agarózových gélov.

Agaróza je polysacharid (ako je agar a pektín), ktorý sa rozpúšťa vo vriacej vode a potom gély, keď ochladzuje ako želatína. Na uskutočnenie elektroforézy sa pripraví agarózový gél, DNA sa zavedie do malých gélových jamiek a potom sa cez gél privádza elektrický prúd. Ako DNA je negatívne nabitá, priťahuje ju pozitívna elektróda. Avšak na dosiahnutie pozitívnej elektródy musí DNA migrovať cez agarózový gél.

Menšie fragmenty DNA môžu migrovať agarózovým gélom rýchlejšie ako väčšie fragmenty DNA. Miera migrácie lineárnych fragmentov DNA agarózou je nepriamo úmerná log10 ich molekulových hmotností.

Presnú veľkosť daného fragmentu môžete vypočítať na základe jeho migračného pomeru. Po gélovej elektroforéze sa fragmenty DNA obvykle zafarbia etídiumbromidom, ktorý má afinitu k DNA a fluoreskuje (stáva sa viditeľným) živo pri kontakte s ultrafialovým svetlom. Týmto spôsobom môžete vyhľadať pásy, ktoré zodpovedajú DNA. Fragmenty DNA sa potom môžu izolovať a purifikovať z agarózových gélov.

Čo teraz? Čo robíte s týmito fragmentmi DNA?