Informácie

Enzýmy reštrikcie: Molekulárne nožnice

Enzýmy reštrikcie: Molekulárne nožnice


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Od 70. rokov bolo ľahšie analyzovať molekulu DNA izoláciou reštrikčných enzýmov.

Tieto enzýmy sú endonukleázy, tj vo vnútri (odtiaľ predpona endo- vo vnútri) molekuly DNA ich rozrezaním na presne definované miesta.

Jedná sa o enzýmy bežne produkované baktériami, ktoré majú vlastnosť ich chrániť pred napadnutím vírusmi. Tieto látky vždy „strčia“ molekulu DNA v určitých bodoch, čo vedie k produkcii fragmentov obsahujúcich lepiace hroty, ktorý sa môže viazať na iné konce molekúl DNA, ktoré boli rozštiepené rovnakým enzýmom.

V genetickom inžinierstve slúži získanie fragmentov DNA na vytvorenie, in vitro (do skúmavky alebo laboratória), nové molekuly, rezanie a vkladanie rôznych informácií.

Jeden z prvých reštrikčných enzýmov, ktoré sa mali izolovať, bol ECOR, produkované baktériami Escherichia coli. Tento enzým rozpoznáva iba sekvenciu GAATTC a vždy koná medzi G a prvým A.

„Miesto rezu“, miesto enzýmu, je známe ako cieľové miesto. Možno sa pýtate, prečo tento enzým nepôsobí na DNA samotných baktérií? Nie je to kvôli existencii iných ochranných enzýmov, ktoré bránia pôsobeniu reštrikčných enzýmov na genetický materiál baktérií.

reštrikčné enzýmy rozpoznávajú a pôsobia na špecifické sekvencie DNAkatalyzáciou deštrukcie fosfodiesterovej väzby medzi dvoma po sebe nasledujúcimi bázami naviazanými na určité bázy. Nukleotidy, medzi ktorými enzým štiepi, to znamená, medzi ktorými podporuje hydrolýzu, sú v rámci tých istých špecifických rozpoznávacích sekvencií (pozri obrázok).

Každá molekula DNA môže byť zložená z viacerých opakovaní sekvencie GAATTC po celej svojej dĺžke. Preto sa po kontakte s enzýmom EcoRI môže DNA vlákno štiepiť „rozrezať“ na niekoľkých miestach, čím sa vytvorí niekoľko kúskov rôznych veľkostí.

Ďalej uvidíme, ako sa tieto rôzne kúsky štiepenej DNA separujú.