Informácie

Úloha chloridu vápenatého počas kompetentnej prípravy buniek

Úloha chloridu vápenatého počas kompetentnej prípravy buniek


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Som si vedomý skutočnosti, že $CaCl_2$ sa usadzuje na bunkovej stene, čím je menej negatívny vytvorením väzby s kyselinou teichoovou. Tiež vďaka pozitívnemu náboju priťahuje DNA (DNA je negatívne nabitá kvôli fosfátovej skupine). Existuje však ešte niečo, čo $CaCl_2$ robí? Tiež, ak je to práca $CaCl_2$, prečo pridávame $MgCl_2$ ako prvý do štandardného protokolu chemickej prípravy kompetentných buniek?


Hoci nemáme žiadny presvedčivý dôkaz o tom, ako $CaCl_2$ funguje, navrhovaný mechanizmus je veľmi podobný tomu, čo ste navrhli. Keď $CaCl_2$ disociuje vo vodnom roztoku, ióny $Ca^{2+}$ sa viažu na fosfátové skupiny v DNA, ako aj na vnútorné jadro lipopolysacharidov v bunkovej membráne (Dagert a kol, 1979), ktorá ich neutralizuje. Potom tepelný šok umožňuje príjem tejto DNA do hostiteľa (ako funguje tepelný šok tiež nie je známe; predpokladá sa, že zvýšená teplota vytvára póry v bunkovej membráne, pozri túto odpoveď). Pre vizuálne znázornenie si pozrite tento diagram (odtiaľ):

Čo sa týka $MgCl_2$, ani úloha $Mg^{2+}$ nie je úplne pochopená. Je však známe, že $Mg^{2+}$ podporuje rast buniek (Hanahan a kol, 1983). Môže to byť preto, že $Mg^{2+}$ je dôležitým faktorom potrebným pre fungovanie ribozómov (Nierhaus a kol, 2014). V každom prípade sa zdá, že jeho úloha pri zvyšovaní kompetencie je menšia ako úloha $Ca^{2+}$.

P.S.: počas experimentu $Mn^{2+}$, $Rb^+$ a $K^+$ tiež efektívne fungujú spolu s $Ca^{2+}$ (Hanahan a kol, 1983).

Referencie:

  1. Dagert, M.; Ehrlich, S. (1979). „Predĺžená inkubácia v chloride vápenatom zlepšuje kompetenciu o Escherichia coli bunky“. Gene. 6 (1): 23-28. doi:10.1016/0378-1119(79)90082-9. PMID 383576

  2. Douglas Hanahan, Štúdie o transformácii Escherichia coli s plazmidmi, Journal of Molecular Biology, zväzok 166, vydanie 4, 1983, strany 557-580, ISSN 0022-2836, http://dx.doi.org/10.1016/S0022-2836(83)80284-8.

  3. Nierhaus K.H. $Mg^{2+}$, $K^+$ a ribozóm J. Bacteriol. 2014 196 3817-3819