Informácie

Navrhnutá CD8 T-bunková terapia pre infekciu HIV

Navrhnutá CD8 T-bunková terapia pre infekciu HIV


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

CD8 T-bunky sú účinné pri kontrole HIV počas skorej fázy infekcie. Časom však vírus zmutuje a vyvinie mechanizmus úniku proti CD8 T-bunkám. Keďže rakovinové bunky tiež rozvíjajú mechanizmy imunitného úniku a vedci používajú niekoľko techník na blokovanie tohto mechanizmu, myslím si, že by bolo možné kontrolovať aj „únik vírusu“. Urobil som nejaký výskum týkajúci sa imunoterapie HIV, ale jediné, čo som našiel, bola imunoterapia založená na protilátkach. Moja otázka znie, bolo by technicky možné vytvoriť vlastné CD8 T-bunky, ktoré budú zacielené na bunky infikované HIV?


Ľudia v komentároch naznačujú, že by to "dohnalo pacienta skôr k AIDS", alebo že to bude neúčinné kvôli spiacemu vírusu. Ani jedno nie je správne.

Otázka sa pýta na inžinierstvo CD8 s upravenými receptormi T buniek špecifických pre HIV. Toto je logický prístup a vyskúšali ho viaceré skupiny:

  • In vivo supresia HIV antigén špecifickými T bunkami získanými z umelých hematopoetických kmeňových buniek

  • Rekonštitúcia anti-HIV efektorových funkcií primárnych ľudských CD8 T lymfocytov prenosom HIV-špecifických alfabeta TCR génov

  • Vývoj CD8+ T buniek exprimujúcich dva odlišné receptory špecifické pre MTB a HIV-1 peptidy

  • T-bunkové inžinierstvo chimérickým T-bunkovým receptorom so špecifickosťou typu protilátky pre HIV-1 gp120

Krátke vyhľadávanie na Pubmed zobrazí mnoho ďalších článkov. Niektoré z týchto prístupov vstúpili do klinických skúšok; napríklad:

Problém tohto prístupu nie je v tom, že „pacienta skôr privedie do AIDS“. Silná odozva CD8 T buniek dobre kontroluje HIV, a hoci by mohla byť jedným z prispievateľov k strate CD4 T buniek, už sa neverí, že je to hlavná príčina, najmä v skorých štádiách infekcie HIV.

Všeobecný problém s CD8 kontrolou HIV je ten, že vírus je schopný mutácie, aby sa vyhol kontrole CD8. V podstate každý prípad HIV je účinne kontrolovaný odpoveďou CD8 T buniek v počiatočnom štádiu infekcie, ale vírus potom zmutuje a unikne kontrole, potom sa odpoveď CD8 prispôsobí a znova ovládne vírus a vírus zmutuje a unikne... Toto môže byť a bolo sledované u mnohých pacientov, pričom sa ukazuje, že opakované odrazy vírusu v krvi korelujú so zmenami CD8.

Lepšia kontrola CD8 HIV je spojená so širšou odpoveďou CD8 - to znamená, že útočí na mnohé vírusové proteíny, takže únik vírusu vyžaduje viaceré súčasné mutácie (pre vírus exponenciálne ťažšie). (Alternatívne môže odpoveď CD8 napadnúť malý počet proteínov, ktoré sú veľmi obmedzené, takže vírus ich nemôže úspešne zmutovať. Zdá sa však, že z dôvodov súvisiacich s obmedzením MHC to funguje len u malej menšiny ľudí. )

Skonštruovaná odpoveď CD8 T buniek bude nevyhnutne na jeden alebo malý počet vírusových proteínov. To je koncepčne podobné prirodzenej situácii po infekcii HIV, čo znamená, že výsledok môže byť rovnaký - vírusová mutácia a imunitný únik.

Pretože skonštruovanie TcR znamená, že si svoje ciele môžete vybrať racionálne, možno sa vám podarí lepšie, než je prirodzená situácia, ale nie je to zrejmé. Celkovo skutočnosť, že skupiny pracujú na tomto prístupe celé desaťročia, zatiaľ bez prelomového lieku, naznačuje, že by to mohlo byť užitočné, ale nebude to nič zlého.


Štruktúra CD8

CD8 existuje ako disulfidovo spojený dimér oboch α a β reťaz alebo dve α reťaze. Kryštalická štruktúra N-koncových 113 aminokyselín ľudského CD8 odhalila homológiu s variabilnými doménami imunoglobulínu (Ig) s deviatimi β pramene rozdelené na dva β listy, jeden zo štyroch a druhý z piatich prameňov. V CD8 je prítomný medzivrstvový disulfidový mostík podobný Ig z B vlákna do F vláknaα. Ďalšia disulfidová väzba môže byť vytvorená medzi cysteínmi v B vlákne a C vlákne. Pántová oblasť spájajúca amino-koncovú Ig-podobnú doménu s transmembránovým segmentom pozostáva z 50 zvyškov v α reťazec a 30 zvyškov v β reťazec, pričom oba sú pravdepodobne glykozylované a sialylované. Úroveň sialylácie na β pántová oblasť reťazca sa mení so stavom aktivácie T bunky a môže mať funkčné dôsledky pre CD8 (obrázok 1).

Postava 1 . Trojrozmerný molekulárny model N-koncovej oblasti homodiméru CD8 pozostávajúceho z dvoch reťazcov a (A) prezentácia stuhy, (B) prezentácia tyčinky. Štrukturálne údaje pre N-koncových 113 aminokyselín sú založené na kryštalografii (proteínová databáza: 1CD8). Trojrozmerný model pre každý monomér bol vytvorený pomocou RasMol verzie 2.5 (Roger Sayle, Greenford, Middlesex, UK) a tieto dva monoméry sa spojili, ako je opísané (Leahy a kol(1992) cell 68:1145). Farebné kódovanie predstavuje skupiny, ktoré modrá zodpovedá slučke podobnej CDR1, svetlomodrá slučke podobnej CDR2 a limetková slučke podobná CDR3. Monoméry sa vyznačujú jasom farby. (Pozri tiež farebný štítok 11.)


Dysfunkčné fenotypy CD4+ a CD8+ T buniek sú porovnateľné u pacientov, ktorí začali ART počas skorej alebo chronickej infekcie HIV-1

Včasné začatie antiretrovírusovej terapie (ART) sa stáva bežnou klinickou praxou podľa súčasných smerníc, ktoré odporúčajú liečbu všetkým pacientom infikovaným HIV-1. Nie je však známe, či ART iniciovaná počas skorej fázy infekcie bráni vytvoreniu abnormálnych fenotypových znakov predtým hlásených v CD4+ a CD8+T bunkách počas chronickej infekcie HIV-1. V tejto prierezovej štúdii boli vzorky krvi získané od 17 pacientov infikovaných HIV-1, ktorí začali liečbu ART krátko po infekcii (skorá ART [EA]), od 17 pacientov infikovaných HIV-1 zodpovedajúceho veku, ktorí začali ART počas chronickej fázy infekcie (neskoré ART [LA]) a 25 vekovo zodpovedajúcich kontrol neinfikovaných HIV-1. Pri odbere vzoriek pacienti v skupinách EA a LA dostávali ART počas porovnateľných časových období. Celková HIV-1 DNA sa merala v bielych krvinkách kvantitatívnou PCR. V plazme sa merala koncentrácia 9 zápalových parametrov a 1 markera fibrózy, vrátane sCD14 a β-2 mikroglobulínu. Ďalej sa na CD4+ a CD8+T merala expresia markerov abnormálnej imunitnej aktivácie (ľudský leukocytový antigén – súvisiaci s antigénom D [HLA-DR] a CD38), vyčerpania (programovaná smrť 1, CD28, CD57) a terminálnej diferenciácie (CD127). bunky. Proliferácia T-buniek sa merala prostredníctvom expresie Ki67. Kópie celkovej HIV-1 DNA v krvi boli významne nižšie (P = 0,009) v EA v porovnaní s LA skupinou. Iba expresia HLA-DR na naivných CD4+ T bunkách odlišovala EA od LA, zatiaľ čo expresia 3 povrchových markerov odlišovala populácie T-buniek pacientov infikovaných HIV-1 od kontrol. Tieto zahŕňali HLA-DR rozlišujúce CD4+ T bunky od EA v porovnaní s kontrolami a tiež CD38 a CD127 na CD4+ a CD8+ T bunkách, v danom poradí, čím sa obe skupiny pacientov odlíšili od kontrol. Hladiny sCD14 boli významne vyššie u pacientov s EA a hladiny β-2 mikroglobulínu boli vyššie v skupine LA v porovnaní s kontrolnou skupinou. Naše výsledky demonštrujú ekvivalentnú abnormálnu expresiu markerov aktivácie (HLA-DR a CD38 na CD4+ T bunkách) a terminálnej diferenciácie (CD127 na CD8+ T bunkách) v T bunkách od pacientov s EA aj LA. Veľkosť celkových kópií HIV-1 DNA v krvi EA bola nižšia v porovnaní s pacientmi s LA. Tieto zistenia naznačujú, že niektoré abnormality vyskytujúce sa v kompartmente T-buniek počas primárnej infekcie HIV-1 nemusia byť korigované včasnou ART.

Vyhlásenie o konflikte záujmov

Autori nemajú žiadne konflikty záujmov, ktoré by mohli zverejňovať.

Figúrky

Počet CD4+ T-buniek a CD4+/CD8+…

Počet CD4+ T-buniek a pomer CD4+/CD8+ v krvi jedincov liečených počas…

Frekvencia CD4+ a CD8+ T buniek a ich podskupín v PBMC. The…

Frekvencia CD38++ CD4+, HLA-DR+…

Frekvencia podskupín CD38++ CD4+, HLA-DR+ CD4+ a CD127− CD8+ T-buniek. Frekvencia…

Frekvencia Ki67 vyjadrujúca…

Frekvencia Ki67 exprimujúcich CD4+ a CD8+ T bunky. Frekvencia…

Veľkosť celkových kópií DNA HIV-1 a jej korelácia k subpopuláciám T-buniek a…


Dôkazy o terapeutickej účinnosti a súčasných obmedzeniach autológnej HSCT

Celosvetovo sa doteraz uskutočnilo alebo v súčasnosti prebieha viacero klinických štúdií zameraných na rozvoj rezistencie voči infekciám po genetickej modifikácii CD4+ alebo HSC. 7 Súhrn nedávnych geneticky modifikovaných CD4+ T-buniek a CD34+ HSC klinických štúdií u pacientov infikovaných HIV-1– je uvedený v stôl 1 . Je významné, že po infúzii geneticky modifikovaných buniek boli hlásené len menšie komplikácie, čo naznačuje, že tento terapeutický prístup, aj keď je komplexný z hľadiska podávania, nie je škodlivý z hľadiska bezpečnosti pacienta. 8,9,10,11 Štúdie od Simonelliho a kol. 10 ukázali, že replikácia vírusu nie je zvýšená a rezervoáre HIV nestúpajú nad úroveň pred transplantáciou. Okrem toho sa uvádza, že imunitné zotavenie po autológnej HSCT u pacientov infikovaných HIV-1– je identické v porovnaní s pacientmi s HIV-negatívnym lymfómom. 10

Stôl 1

Mitsuyasu a kol. 12 uviedli zistenia z klinickej štúdie fázy 1/2 zahŕňajúcej autológnu transplantáciu CD34+ HSC geneticky modifikovaných tak, aby exprimovali OZ1 (ribozým proti vpr a tat prekrývajúce sa čítacie rámce HIV-1), v ktorých hladiny značenia 0,38 % v periférnej krvi viedli k terapeuticky prospešnému výsledku. Pri porovnaní experimentálnych a kontrolných skupín sa vírusová záťaž znížila s nižšou mierou rebound fenoménu plazmatickej virémie, čo malo za následok predĺženie trvania pred opätovným začatím liečby HAART. Najdôležitejšie je, že CD4 + T bunky sa zvýšili v experimentálnej kohorte, čo demonštruje terapeutickú hodnotu transplantácie geneticky modifikovaných HSC. 12,13 Je ťažké priradiť presnú koreláciu medzi klinickými prínosmi po infúzii geneticky modifikovaných HSC v porovnaní s tým, ktorý sa typicky pozoruje v akomkoľvek transplantačnom prostredí po infúzii nemodifikovaných HSC. Myeloblácia a rekonštitúcia po prihojení HSC povedie k počiatočnému poklesu periférnych CD4+ T buniek nesúcich provírusovú DNA, avšak ukázalo sa, že obsah provírusovej DNA v periférnej krvi sa postupne zvyšuje napriek pokračujúcej ART. 14,15

Ako bolo pozorované vo vyššie uvedenom klinickom skúšaní a popri všetkých doteraz publikovaných klinických skúšaniach, v ktorých sa pacientom s HIV-1 infúziou podávajú génovo modifikované bunky, u pacientov s infúziou buď geneticky modifikovaných HSC, alebo CD4+ T bunky. Klinické štúdie ešte musia postúpiť do štádia účinnosti a stanovenie prahu geneticky modifikovaných HSC, ktoré sú potrebné na to, aby účinne viedli ku klinicky prospešnému výsledku, bude významnou prekážkou založenou na úrovniach, ktoré sa v súčasnosti dajú dosiahnuť. 12,13,14,15,16 Možnosť pre in vivo Ukázalo sa, že selekcia prostredníctvom zahrnutia selekčnej kazety do gamaretrovírusových a lentivírusových vektorov je mimoriadne účinná v modeli primátov okrem človeka (NHP) po liečbe chemoterapeutickými činidlami. 17,18 Táto možnosť sa v súčasnosti skúma v prebiehajúcej klinickej štúdii u pacientov s lymfómom infikovaných HIV-1– ( <"type":"clinical-trial","attrs":<"text":"NCT01769911","term_id ":"NCT01769911">> NCT01769911), aj keď vyhliadka na použitie chemoterapeutických činidiel u pacientov s HIV-1 bez lymfómu je menej než príťažlivá možnosť.

Napriek svojim obmedzeniam bola v klinických štúdiách pozorovaná pozitívna selekcia geneticky modifikovaných CD4+ T buniek po infúzii génom modifikovaných CD34+ buniek a po priamej infúzii geneticky modifikovaných CD4+ T buniek. 11,18 V pediatrickej klinickej štúdii, Podsakoff a kol. 11 uviedli, že po infúzii CD34+ HSC geneticky modifikovaných génom hum10, dominantným negatívnym proteínom Rev, sa génovo modifikované CD4+ T bunky zvýšili z nedetegovateľných na 1/10 000 po prerušení liečby. Zvýšenie génového značenia však nebolo dlhodobo trvalé a táto štúdia preukázala selektívnu výhodu CD4+ T buniek odolných voči infekcii in vivo. 11 Priama genetická modifikácia a infúzia CD4+ T buniek tiež poskytla podobné výsledky pri poskytovaní selektívnej výhody CD4+ T bunkám exprimujúcim anti-HIV gény. V porovnaní s CD4+ T bunkami exprimujúcimi kontrolný gén, anti-HIV gén obsahujúci CD4+ T bunky vykazoval zvýšenie tak dlhodobej, ako aj krátkodobej pozitívnej selekcie. Podobne ako výsledky uvádzané skupinou Podsakoff, počas obdobia vyššej replikácie vírusu bol vrchol buniek obsahujúcich anti-HIV gén. 18 Naproti tomu van Lunzen a kol. 8 neuvádza žiadne pozorovania selektívnej výhody pre geneticky modifikované CD4+ T bunky exprimujúce peptid inhibujúci fúziu mC46. Dôvody citované pre tento výsledok zahŕňajú možnú imunitnú odpoveď, downreguláciu expresie mC46 a komplikácie vyplývajúce z ex vivo expanzia, ktorá by zase mohla vytvoriť nevýhodu prežitia pre proliferáciu génovo modifikovanej bunkovej populácie. 8

Na zvýšenie celkového percenta geneticky modifikovaných buniek je potrebné pokračovať v úsilí in vivo. Ukázalo sa, že napriek nízkym hladinám pozorovaným po počiatočnej infúzii HSC, geneticky modifikované bunky zostávajú detekovateľné niekoľko rokov po autológnej transplantácii HSC. 8,11,12,13 Samotný HIV by sa mohol použiť ako selektívne činidlo in vivo po ukončení HAART je však dôležité poznamenať v našich štúdiách NHP, nemodifikované CD4+ T bunky pretrvávajú napriek jasnej selektívnej výhode po akútnej fáze infekcie. Obnova nemodifikovaných buniek predstavuje významnú výzvu pri udržiavaní znížených vírusových rezervoárov po ukončení HAART.

V nasledujúcej časti navrhujeme, aby bola autológna transplantácia úspešná ako alternatívna terapia pre pacientov infikovaných HIV-1–, po infúzii a prihojení geneticky modifikovaných jedincov odolných voči infekcii musí byť dosiahnuteľný fenotyp porovnateľný s elitnými alebo prirodzenými kontrolórmi. HSC. Ako už bolo uvedené, autológna transplantácia sama osebe nevedie k eliminácii vírusových rezervoárov, ale vedie skôr k významnému zníženiu počtu buniek obsahujúcich provírus. 15 Schopnosť očkovaných populácií imunitných buniek odolných voči infekcii kontrolovať replikáciu vírusu v neprítomnosti ART bude vo veľkej miere určovať účinnosť autológnej transplantácie ako liečebnej terapie pre pacientov infikovaných HIV-1–.


CAR T bunky pre autoimunitné ochorenie

Mnohé najmodernejšie spôsoby liečby autoimunitných ochorení nie sú liečebné, majú výrazné vedľajšie účinky a neliečia všetky komplikácie súvisiace s ochorením. Preto sú zúfalo potrebné rušivé terapie, ako sú terapie založené na CAR T bunkách. Napríklad efektorové CAR T bunky by mohli byť zamerané na zabíjanie patologických imunitných buniek autoimunitného ochorenia. Alternatívne možno toľko autoimunitných ochorení pripísať kombinácii suboptimálnej funkcie, obchodovania s ľuďmi, stability a hojnosti Treg bunky, CAR by sa mohli použiť na vedenie Treg bunky do autoimunitného prostredia, kde môžu byť aktivované, proliferovať a vykonávať svoju supresívnu funkciu. Oba prístupy rozoberieme nižšie.

Chimérne autoprotilátkové receptory

V chimérických autoprotilátkových receptoroch (CAARs) pozostáva extracelulárna časť receptora z proteínového cieľa samoreaktívnych protilátok, čo umožňuje CAAR T bunkám ničiť autoimunitné B bunky spôsobom analogickým spôsobu, akým sa CD19CAR T bunky zameriavajú a ničia. B bunkové leukemické bunky. Keď sa teda B bunkový receptor (BCR) autoimunitnej B bunky z polyklonálneho poolu stretne s efektorovou CAAR T bunkou, je zničený a nemôže produkovať autoprotilátky. Predklinický dôkaz koncepcie bol získaný z humanizovaného myšacieho modelu pemphigus vulgaris, v ktorom sa autoimunitné B bunky zameriavajú na desmogleíny spôsobujúce pľuzgiere na koži a iných slizniciach. Pacienti s týmto ochorením sa tradične liečia kortikosteroidmi a inými široko imunosupresívnymi látkami, ktoré znižujú celotelový imunodozor. Efektorové T bunky exprimujúce CAAR, ktorý pozostáva z desmogleínu 3 fúzovaného so signálnou doménou 4-1BB–CD3ζ druhej generácie, interagovali s príbuznými BCR a indukovali lýzu patogénnych B buniek86. Pretože efektorové CAAR T bunky fungujú tak, že zabíjajú ich príbuzné bunkové ciele, poznatky získané z prebiehajúcich klinických a laboratórnych štúdií efektorových CAR T buniek na terapiu rakoviny sa pravdepodobne budú vzťahovať aj na efektorovú CAAR T bunkovú terapiu. Použitie efektorových CAAR T buniek by sa mohlo rozšíriť na liečbu iných patológií sprostredkovaných B bunkami, ako je systémový lupus erythematosus alebo reumatoidná artritída. Okrem toho by sa CAAR T bunky zacielené na CAR molekulu mohli použiť ako bezpečnostný spínač na elimináciu autoimunity spôsobenej predchádzajúcou infúziou efektorových CAR T buniek87.

Presmerovanie regulačných T buniek

Nedávno bolo dokončených niekoľko klinických štúdií fázy I testujúcich bezpečnosť a uskutočniteľnosť použitia polyklonálneho Treg bunky na oddialenie progresie diabetu 1. typu a prevenciu reakcie štepu proti hostiteľovi (GVHD) po transplantácii kostnej drene88,89,90,91. Tieto priekopnícke štúdie ukázali, že generovanie veľmi veľkého počtu Treg buniek spôsobom v súlade s GMP je uskutočniteľné 92,93 a že veľké Treg infúzie buniek sú dobre tolerované pacientmi bez dôkazu globálnej imunosupresie. Dôležité je, že výskyt akútnej GVHD pozorovaný u pacientov liečených rozšíreným Treg počet buniek bol znížený. Okrem toho v štúdii pacientov s diabetom 1. typu Treg bunky sa našli až rok po infúzii, čo naznačuje, že infúzne Treg bunky môžu pretrvávať, a teda môžu byť schopné podporovať dlhodobú toleranciu.

Zavedenie CAR do Treg buniek je atraktívny spôsob generovania antigén-špecifického Treg bunky. Okrem zníženia počtu Treg buniek, ktoré sú potrebné na účinnú odpoveď94, antigénna špecifickosť by mala obmedziť prenos a mimocieľovú supresiu injikovaného Treg bunky. Existujú však kľúčové rozdiely v biológii Treg bunky a efektorové T bunky, vrátane ich reakcií na stimuláciu TCR95, koreceptorovú ligáciu96 a cytokíny97, čo spochybňuje, do akej miery budú aplikovateľné axiómy stanovené z použitia efektorových CAR T buniek u pacientov s rakovinou na CAR Treg bunky.

V porovnaní s terapiami na infekciu HIV a rakovinu založenou na CAR je použitie CAR Treg bunky na boj proti autoimunite je relatívne nový pojem. V prelomovej štúdii CAR Treg bunky špecifické pre kyselinu 2,4,6-trinitrobenzénsulfónovú (TNBS) boli použité v myšom modeli kolitídy vyvolanej TNBS98. Autori ukázali, že CAR Treg bunky by sa mohli proliferovať antigénovo špecifickým spôsobom prenosu a akumulovať sa v cieľovom orgáne, aby zabránili alebo zlepšili TNBS-indukovanú kolitídu pri suboptimálnych dávkach, pri ktorých polyklonálny Treg bunky nemali žiadny účinok a podporovali supresiu inej formy kolitídy v prítomnosti cieľového antigénu. Neskoršie štúdie stavali na týchto zisteniach tým, že ukázali schopnosť CAR Treg bunky na prevenciu a/alebo zlepšenie ochorenia u iných myších modelov kolitídy99, rakoviny spojenej s kolitídou100 a experimentálnej autoimunitnej encefalomyelitídy101. Tieto štúdie na myšiach poskytujú silný dôvod na presun CAR Treg bunkovej terapie do predklinických štúdií. V rámčeku 1 diskutujeme o tom, prečo je transplantácia s nezhodou MHC atraktívnou indikáciou na prvé testovanie CAR Treg bunky na klinike.

Rámček 1 Smerom k prvej klinickej štúdii terapie regulačnými T bunkami exprimujúcimi CAR

Regulačný T exprimujúci chimerický antigénový receptor (CAR) (Treg) bunky, ktoré rozpoznávajú molekuly HLA (alošpecifické Treg bunky) môžu poskytnúť ideálny scenár na testovanie terapeutík CAR T buniek na autoimunitu (pozri obrázok pre idealizovaný pracovný postup). Ľudské HLA molekuly v kontexte HLA-disparátnej transplantácie sú ideálnymi cieľmi pre CAR, pretože antigén je hojný a exprimovaný výlučne na transplantovanom orgáne. Okrem toho ligácia molekúl HLA pomocou CAR Treg Je nepravdepodobné, že by bunky mali nejaký negatívny vplyv na funkciu štepu, pretože tieto molekuly nemajú žiadny signálny potenciál134. CAR T špecifické pre HLA-A2reg bunky boli použité na ochranu proti reakcii štepu proti hostiteľovi a odmietnutiu kožného transplantátu u imunodeficientných myší59,60,61. AUTO Treg bunkové populácie, ktoré boli transdukované a expandované in vitro, mali normálne hladiny expresie proteínu vidlicového boxu P3 (FOXP3) a demetyláciu Treg bunkovo ​​špecifickej demetylovanej oblasti a zachovali si schopnosť expandovať do vhodného terapeutického počtu buniek. Dôležité je, že aktivácia CAR spôsobila minimálnu cytotoxicitu cieľových buniek121. Okrem toho vysoké úrovne konzervácie medzi opičými a ľudskými molekulami MHC 135 zvyšujú možnosť priameho hodnotenia ľudských HLA-špecifických CAR konštruktov pri transplantáciách orgánov medzi primátom a primátom. Transplantácia pečene je atraktívnou oblasťou na testovanie alošpecifických Treg bunky. Jednoročná miera prežitia štepu je vysoká, ale dlhodobá imunosupresia môže znížiť periférnu imunitu a spôsobiť nefrotoxicitu u príjemcov štepu. Nedávne klinické štúdie ukázali, že niektorí príjemcovia transplantátu môžu byť bezpečne odstavení od drog, čím sa vytvoril scenár, v ktorom CAR Treg bunková terapia by mohla byť testovaná na svoju schopnosť podporovať toleranciu po odstránení imunosupresie136,137,138. U tých pacientov, u ktorých počas procesu odvykania došlo k akútnej rejekcii, je možné znovu iniciovať imunosupresíva, aby sa rejekcia zastavila. Okrem toho funkčné pečeňové testy umožňujú neinvazívne monitorovanie odmietnutia štepu a biopsie sú v prípade potreby rutinné.

Výber cieľa

Podobne ako pri použití CAR T buniek u pacientov s rakovinou, ideálny antigénový cieľ pre CAR Treg bunky pri autoimunitnom ochorení budú vysoko exprimované na bunkovom povrchu a expresia bude obmedzená na požadovaný bunkový typ alebo tkanivo (pozri tabuľku 2 na porovnanie vlastností efektorových CAR T buniek a CAR Treg bunky). Bohužiaľ, ťažkosti s identifikáciou ideálneho cieľa pre rakovinovo špecifické efektorové CAR T bunky sú spoločné aj pre CAR Treg bunky. Dôsledky uznania mimo cieľa sú však veľmi odlišné. Reaktivita efektorových CAR T buniek proti cieľovému, mimonádorovému tkanivu môže mať vážne účinky. Napríklad efektorové CAR T bunky špecifické pre ľudský receptor epidermálneho rastového faktora 2 (HER2 tiež známy ako ERBB2) spôsobili fatálny syndróm akútnej respiračnej tiesne u jedného pacienta v dôsledku nízkej hladiny expresie cieľového antigénu v pľúcach102. Naproti tomu mimotkanivová reaktivita CAR Treg bunky budú mať pravdepodobne menej závažné následky, keďže je známe, že infúzia polyklonálneho Treg bunky nespôsobujú oportúnnu infekciu alebo rakovinu88,89,90,91. Avšak tonická signalizácia, ktorá bola pozorovaná pre niektoré CAR konštrukty 54, môže poskytnúť CAR Treg konštitutívna supresívna aktivita buniek, teda bezpečnostný profil nemodifikovaného Treg bunky nemusia predpovedať bezpečnostný profil CAR Treg bunky. Jeden problém týkajúci sa rozpoznávania cieľového, mimo tkaniva CAR Treg buniek je, že tieto bunky sa môžu prednostne usadiť v mieste mimo tkaniva na úkor toho, kde sú potrebné, a teda tieto mimotkanivové záchyty môžu obmedziť účinnosť antigén-špecifického Treg bunkovej terapie. Okrem toho akumulácia Treg bunky v inak zdravom tkanive môžu vytvárať prostredie, ktoré je priaznivé pre tvorbu nádorov alebo prežitie patogénov, ale podľa našich najlepších vedomostí to zatiaľ nebolo experimentálne riešené.

Stabilita buniek

Ak sa efektorová CAR T bunka konvertuje buď na vyčerpanú T bunku alebo Treg bunka, je nepravdepodobné, že by to vyvolalo nejaké bezpečnostné obavy. Táto konverzia môže znížiť účinnosť terapie a teoreticky, ak by sa väčšina efektorových CAR T buniek konvertovala na Treg bunky, potom by to mohlo urýchliť progresiu ochorenia, čo však nebolo doteraz pozorované v testoch rakoviny. Naproti tomu, ak by CAR Treg bunky konvertujú na efektorové T bunky, pretože to má potenciál zhoršiť progresiu ochorenia.

Dôkazy zo štúdií na myšiach ukazujú, že keď Treg bunky sú vystavené zápalovým stavom, niektoré bunky strácajú expresiu forkhead box proteínu P3 (FOXP3) a získavajú prozápalovú funkciu103. Konverzia CAR T špecifického pre β bunkyreg bunky do efektorových T buniek pravdepodobne zosilnia usmrcovanie β buniek pankreatických ostrovčekov a urýchlia, a nie oddialia, progresiu diabetu 1. typu. Ďalším spôsobom, akým by mohli vzniknúť efektorové T bunky nesúce CAR, je, ak kontaminujú izoláciu Treg bunky, ktoré sa používajú pre zdrojový materiál. Ako už bolo uvedené, Treg bunky sú vzácnou populáciou a dosiahnutie 100 % čistoty bude takmer nemožné s použitím súčasných GMP činidiel v klinickom meradle. Keďže úplne nerozumieme tomu, ako efektorové CAR T bunky a CAR Treg bunky sa odlišne množia a prenášajú in vivo, je možné, že malá populácia efektorových CAR T buniek by mohla expandovať alebo prenášať 104 oveľa rýchlejšie ako CAR Treg bunky, s ničivými následkami. Opak je tiež znepokojený tým, že Treg bunky by mohli kontaminovať infúzne produkty efektorových CAR T buniek. Avšak Treg bunky možno ľahko odstrániť z infúzneho produktu selekciou na anti-CD25 guľôčkach pred transdukciou a kultivačné podmienky, ktoré sa používajú na proliferáciu efektorových T buniek in vitro, nezvýhodňujú Treg bunková proliferácia 105 .

Bezpečnosť

Bolo navrhnutých niekoľko stratégií na minimalizáciu možnosti, že efektorové T bunky budú exprimovať CAR, ktoré majú byť exprimované Treg bunky. Po prvé, výber počiatočného východiskového materiálu bude dôležitý. Skonštruovaný Treg bunky odvodené z pupočníkovej krvi, a nie z mononukleárnych buniek periférnej krvi dospelých (PBMC), budú pravdepodobne najbezpečnejšie ako východiskový materiál, pretože im chýbajú efektorové T bunky, ktoré vznikajú neskôr v živote, sú ľahko izolované v porovnaní s Treg bunky z periférnej krvi a majú naivný fenotyp, ktorý je spojený s Treg stabilita a funkcia bunkovej línie 106,107,108. Vo väčšine scenárov, pri ktorých pacient nemá kryokonzervovanú autológnu pupočníkovú krv, pupočníková krv tretej strany Treg bunky sú životaschopnou, bezpečnou alternatívou, ktorá sa už používa v klinických skúškach na liečbu GVHD89,90,93,109. Pre iné aplikácie ako GVHD však nie je jasné, ako by potenciálne nezhody MHC mohli ovplyvniť dlhodobú perzistenciu a funkciu infúzneho Treg bunky. V neprítomnosti vhodného zdroja buniek pupočníkovej krvi by sa dospelé PBMC mohli triediť na naivné Treg bunkové markery 106,110,111 za predpokladu, že triedič kompatibilný s GMP bude komerčne dostupný.

Na testovanie stability rozšíreného Treg bunkový produkt, metylácia Treg bunkovo ​​špecifická demetylovaná oblasť môže fungovať ako marker pre potenciál konverzie efektorových T buniek112. Tento test je možné vykonať za menej ako 24 hodín a bol zahrnutý do kritérií uvoľnenia produktu rozšíreného Treg bunky na infúziu pacienta 113 . Nakoniec sme ukázali, že TCR s príliš nízkou afinitou na fungovanie v efektorových T bunkách bol schopný poskytnúť silnú, antigén špecifickú supresiu, keď je exprimovaný v Treg bunka 114, čo naznačuje, že sila signálu potrebná na aktiváciu Treg Bunka je menšia, než je potrebná na aktiváciu efektorových T buniek. Jedným zo spôsobov, akým je bezpečnosť CAR Treg bunková terapia by sa mohla zlepšiť, bolo by navrhnúť CAR tak, aby mala silu signálu na fungovanie v Treg bunka, ale nie efektorová T bunka.

Po podaní bunkovej terapie pacientovi by schopnosť indukovať apoptózu upravených buniek mohla zmierniť nepriaznivé účinky. Bolo opísaných niekoľko samovražedných prepínačov, pričom podávanie inak inertného liečiva spôsobuje kontrolovanú apoptózu produktu CAR T buniek podaného infúziou115. V budúcnosti by sa mohli predstaviť zložitejšie prepínače, ako napríklad tie, ktoré autonómne indukujú bunkovú smrť, keď CAR T stratí expresiu FOXP3reg alebo keď je zapnutá expresia IL-17 a/alebo iného prozápalového cytokínu.

Štúdie ukázali, že Treg bunky môžu indukovať efektorové T bunky, aby sa stali supresívnymi bunkami aj prostredníctvom procesu známeho ako infekčná tolerancia116. Preto CAR Treg bunky nemusia byť potrebné pre celý terapeutický účinok za predpokladu, že indukujú tvorbu trvalej oligoklonálnej populácie lokálneho Treg bunky. Posledný, úvod FOXP3 do CAR Treg bunky pod kontrolou heterológneho promótora môžu pomôcť udržať expresiu FOXP3 a supresívnu aktivitu, aj keď sú prirodzené FOXP3 výraz sa stráca 117,118,119 . Tento prístup by prinajmenšom pomohol zabezpečiť, že ak je antigén špecifický Treg bunky stratili supresívnu aktivitu, ektopicky exprimovaný FOXP3 by minimalizoval aktivitu výsledných efektorových T buniek.

Signalizácia

Pretože efektorové T bunky a Treg bunky majú odlišné kostimulačné požiadavky, je možné, že kostimulačná doména, ktorá dáva Treg Najsupresívnejšia aktivita bude odlišná od kostimulačnej domény, ktorá poskytuje najsilnejšiu efektorovú T bunkovú aktivitu. Navyše CAR Treg bunky možno bude potrebné jedinečne navrhnúť pre každé cielené autoimunitné ochorenie, pretože výber kostimulačnej domény môže ovplyvniť prenos, metabolizmus a/alebo prežitie CAR Treg bunky. Rastúce dôkazy však naznačujú, že pre CAR T bude potrebná kostimulácia sprostredkovaná CD28reg bunky 120 . Doteraz každá publikovaná CAR zahŕňala CD28 signálnu doménu 98,99,100,101,121,122,123,124,125, keďže je známe, že CD28 signalizácia je nevyhnutná pre správnu Treg udržiavanie, proliferácia a funkcia buniek 126,127 . Neuskutočnila sa žiadna komplexná štúdia porovnávajúca CD28 s inými kostimulačnými doménami, takže iné kostimulačné domény samotné alebo v kombinácii s CD28 môžu byť prospešné. Napríklad intracelulárne domény cytotoxického T lymfocytového antigénu 4 (CTLA4)128, CD27 (ref. 129) a indukovateľného kostimulátora T buniek (ICOS)130 by mohli byť užitočné ako súčasť CAR na základe ich preukázaných úloh v šírenie a rozvoj Treg bunky.

Dávkovanie a perzistencia

Pochopenie optimálnej dávky T buniek na infúziu pacientovi špecifickej pre každú aplikáciu CAR T buniek zlepší bezpečnosť, účinnosť a ekonomickú realizovateľnosť tohto prístupu131,132. CAR T bunky však fungujú ako „živý“ liek, ktorého polčas rozpadu je ťažké určiť, a keďže väčšina našich vedomostí o perzistencii CAR T buniek pochádza z merania ich množstva v periférnej krvi a nie v tkanivách, určovaním optimálnej dávky T bunky budú prinajlepšom komplikované a závislé od choroby. Pre počiatočné štúdie, ktoré používali rozšírený Treg bunkové populácie na prevenciu akútnej GVHD, pacienti, ktorí dostali väčšiu dávku expandovaného Treg bunky mali väčší úžitok ako pacienti, ktorí dostali menšiu dávku, u 43 % pacientov sa vyvinula GVHD nízkeho stupňa v skoršej štúdii s nízkou dávkou, zatiaľ čo len u 9 % pacientov sa vyvinula GVHD v štúdii s vyššou dávkou (v porovnaní so 63 % v prípade kontrol) 90,133. Ako Treg bunky sú vzácnou populáciou buniek, na dosiahnutie cieľovej dávky pre CAR T môžu byť potrebné vysoko účinné kultivačné systémyreg bunky 92,105 . For transplant applications, in which there is an abundance of antigen, a relatively small dose of CAR Treg cells may be sufficient if the therapeutic population can be expanded in the patient.

A successful effector CAR T cell therapy is designed to kill every cancer or virus-infected cell in the patient, thereby eliminating the persistence of its target antigen. When target antigen becomes limiting, the pool of infused CAR T cells may retract to a size where it cannot then respond to a recurrence of cancer cells. By contrast, properly functioning CAR Treg cell therapy will protect its target cells from elimination, and these cells will function as a source of antigen to maintain CAR Treg cell persistence. Thus, successful CAR Treg cell therapy will positively support the maintenance of engineered T cells and thus may have an advantage over effector CAR T cells in terms of generating a durable cure.

Zhrnutie

Ultimately, the adaptation of CAR technology to treat autoimmune diseases and to facilitate organ transplantation has shown promise in the laboratory and in small animal models, which sets the stage for organ transplant studies in MHC-mismatched non-human primates. Yet, we must determine the optimal extracellular binding domains, intracellular signalling domains and manufacturing protocols for these CARs before investigating cell dosage, timing and route of administration in the clinic to maximize the safety, efficacy and durability of a cure. Owing to inherent differences between the biology of Treg cells and the biology of effector T cells, as well as disease-specific requirements, much work remains to be done in developing the prime therapeutic product of CAR Treg bunky.


Immune Cells Genetically Engineered Into Potent Weapons For Battling HIV

By outfitting immune-system killer cells with a new pair of genes, scientists at the Albert Einstein College of Medicine of Yeshiva University transformed them into potent weapons that destroy cells infected with HIV, the virus that causes AIDS. Their novel strategy of genetically engineering immune cells to redirect their infection-fighting ability toward killing HIV-infected cells could lead to an entirely new approach for combating AIDS and other viral diseases.

After someone is infected with HIV, a subgroup of their immune cells known as CD8 cytotoxic T lymphocytes, or CTLs, recognize cells infected with HIV and kill them before they become HIV-producing factories. This CTL activity initially keeps the infection in check.

But then -- largely because these CTLs may not bind tightly enough to the infected cells or because HIV mutates so rapidly -- the virus typically evades and ultimately overpowers the immune system, leading to an increase in viral load that, in the absence of drug therapy, results in AIDS. However, a very small percentage of HIV-infected people known as elite controllers manage to suppress HIV infection for many years.

"Certain of the CTLs of elite controllers may be genetically equipped to bind tightly to HIV-infected cells and destroy them and thereby suppress the infection indefinitely," says Dr. Harris Goldstein, senior author of the study* and Director of the Einstein/Montefiore Center for AIDS Research. "Our idea," says Dr. Goldstein, "was first to identify the elite controllers' "super" CTLs and to isolate the genes that enable these cells to bind tightly to HIV-infected cells and kill them efficiently then we would transfer these genes into CTLs that do not recognize HIV-infected cells and convert them into potent killers of those cells."

After infecting a cell, HIV instructs it to make viral proteins. Tiny bits of these proteins, known as peptides, are displayed on the surface of the infected cell--the cell's way of signaling the immune system that it is infected. Detecting virus-infected cells so they can then be eliminated is the job of CTLs and the protein molecules, known as T-cell receptors, that jut from their surface.

If a CTL's T-cell receptor has the right amino acid sequence, it will recognize the HIV peptide on the infected cell as foreign--prompting the CTL to multiply and attack the infected cell. But all too often, this battle between activated CTLs and HIV-infected cells ends badly. Why, then, are super CTLs of elite controllers so effective in killing HIV-infected cells"

The explanation, the Einstein researchers postulated, is that these CTLs express T-cell receptors that either have a knack for recognizing viral peptides that tend not to mutate, or they bind extremely tightly to HIV-infected cells, enabling the elite controllers to keep their HIV infections under control.

A CTL's T-cell receptor, which is as unique for each CTL as a person's fingerprint, consists of two "chains," alpha and beta. To obtain the blueprint for making exceptionally potent HIV-specific T-cell receptors, the researchers isolated the genes that code for each of the two "chains" from the potent HIV-specific CTL. Then, as a way to efficiently insert both genes into "naïve" CTLs (from people not infected with HIV), they developed an efficient delivery system in which the genes were combined and packaged inside a special type of virus, called a lentivirus. The lentiviruses then inserted these genes into the chromosomes of naïve CTLs obtained from a naïve donor's blood and reprogrammed them into potent HIV-specific CTLs.

"We demonstrated that these genetically reprogrammed CTLs have very strong activity in terms of killing HIV-infected cells in both test tubes and an animal model," says Dr. Goldstein. In some of the animal studies, for example, the researchers injected mice with both HIV-infected human cells and with reprogrammed naïve CTLs into which the HIV-recognizing T-cell receptor genes had been inserted using the lentiviral delivery system. One week later, when the researchers looked for HIV-infected human cells in the animals, they found that the infected cells had virtually been eliminated.

Dr. Goldstein notes that this study was done using genes for just a single CTL T-cell receptor. "To make this strategy even more effective, we're now in the process of isolating a "cocktail" of CTL receptor genes that are specific for many different HIV peptides--an approach analogous to today's combination drug therapy for treating HIV infection," says Dr. Goldstein. "Ultimately, we'd like to remove CTLs from patients, convert them into potent HIV-specific CTLs by inserting a variety of HIV-specific CTL receptor genes, and then re-infuse these fresh, genetically reprogrammed CTLs back into patients. By reinforcing the immune system in this way, we hope to turn the tide of battle against HIV in favor of people infected with the virus."

*The findings appear in the March issue of the Journal of Virology. Besides Dr. Goldstein, other Einstein researchers involved in the study were Aviva Joseph, Jian Hua Zheng, Antonia Follenzi, Teresa DiLorenzo, Kaori Sango, Jaime Hyman, and Ken Cheng. Other researchers were Bruce Walker, Alicja Piechocka-Trocha and Christian Brander of Harvard Medical School and the Howard Hughes Medical Institute Erik Hooijberg of VU University Medical Center of Amsterdam, The Netherlands and Dario Vignali of St. Jude Children's Hospital, Memphis, Tennessee. The research was supported by the National Institutes of Health.


Human memory CD8+ T cells

We conduct innovative studies of human circulating and resident memory CD8+ T cells in health and disease.

CD8+ T cells are absolutely critical for immune control of multiple chronic viral infections, such as HIV, and also represent a major cellular target of immune checkpoint therapies that have entirely revolutionized the treatment outcome in cancer care. However, many still view CD8+ T cells solely as killer T cells eliminating HIV-infected or tumor cells based on concepts from studies of peripheral blood. Emerging data from us and others are demonstrating that most memory CD8+ T cells in human tissues are resident cells with limited recirculation capacity back to peripheral blood. These CD8+ T cells in tissues show differential transcriptional, epigenetic, and functional programming from circulating CD8+ T cells. This is important, as these data indicate that previous studies in blood have largely failed to capture how memory CD8+ T cells function and potentially control human diseases in tissues.

Our group use cutting-edge bulk- and single-cell technologies including 30-parameter flow cytometry, gene-expression, RNA-seq, ATAC-seq, TCR-seq and proteomics analysis to dissect the heterogeneity and function of memory CD8+ T cells. Our lab is located in a vibrant research environment at the Center for Infectious Medicine (CIM) in the top modern ANA Futura laboratories. Here, we function in close conjunction with other research groups at CIM, and also collaborate with clinicians and surgeons at the Karolinska University Hospital Huddinge to receive valuable samples. We also collaborate with other researchers at Karolinska Institutet and Science for Life laboratories in Sweden as well with leading researchers in our field from universities in Denmark, Germany, Great Britain, Spain, and USA.

Through these platforms, we study different aspects of human memory CD8+ T cell biology, with an overall aim to i) identify alternative functions of memory CD8+ T cells in human tissues, ii) delineate the heterogeneity of circulating and resident memory CD8+ T cells in human organ donors and iii) understand how memory CD8+ T cells maintain tumor and HIV control. These different aims are illustrated in the picture.


Engineered, Species-Matched Antibody Allowed for Long-Term CD8+ T-Cell Depletion in Mice

Persistent infection with pathogens such as human immunodeficiency virus (HIV), hepatitis B (HBV) and hepatitis C virus (HCV) affect close to half a billion people worldwide. Despite important progress in treating HIV and the possibility to cure HCV, prophylactic vaccines against HIV or HCV remain out of reach, and the available options to prevent HBV disease progression are unsatisfactory.

In the lab of Prof. Daniel Pinschewer at the University of Basel, Switzerland, researchers are studying mechanisms of effective immune defense in the context of chronic viral infection. Additionally, they work on new viral vector-based vaccine and immunotherapy delivery technology, aimed at preventing or helping to cure persistent viral diseases. As a model of persistent viral infection they study lymphocytic choriomeningitis virus (LCMV), a natural mouse pathogen, which has been widely exploited by immunologists for almost a century. Over decades LCMV research has contributed to several milestone discoveries in the field such as neonatal tolerance, MHC-linkage of disease, MHC restriction of T cell antigen recognition, viral mutational escape from CD8+ T-cells, CD8+ T-cell exhaustion and most recently the ability to reinvigorate exhausted CD8+ T-cells by anti-PD-1 checkpoint blockade.

Team work to combat persistent viral infection

For several years already, a focus of research in the Pinschewer laboratory has been the contribution of antiviral antibody-producing B cells to CD8-mediated virus control. Detailed studies on the B cell biology of persistent infection were sparked by the initial observation that CD8+ T-cell control of protracted infection failed if not seconded by a potent virus-specific antibody response. This originally unintended journey into new territories of LCMV immunobiology led, amongst other findings, to a better understanding how persisting viruses suppress and evade antiviral B cell responses.

Inability to deplete CD8+ T-cells long-term

Studies on the interdependence of CD8+ T-cells and antibody responses in the control of chronic virus infection necessitate experimental models and approaches to selectively deplete CD8+ T-cells. Clearly, short-term transient depletion of CD8+ T-cells is insufficient to comprehensively address this question. However, the efficacy of the widely used anti-CD8 depletion antibodies is of fairly transient nature. In concert with observations by others, the scientists in Pinschewer’s team found that CD8+ T-cells reemerged after about two weeks, even when the depletion antibody was re-administered throughout. The obvious explanation was that the commonly used CD8 depletion antibodies are of rat origin, thus triggering in mice an anti-rat antibody response that critically shortens the depletion antibody’s bioavailability. In line with this, the same problem was not encountered with CD4 depletion antibodies, which remained effective for several weeks. The interpretation was that anti-rat antibody responses of mice were apparently dependent upon CD4+ T-helper cells, thus the very cells depleted by the anti-CD4 antibody.

A novel tool for CD8+ T-cell research in chronic infection

Recently, however, Pinschewer’s lab has been able to successfully deplete CD8+ T-cells long-term. Surfing the web, Daniel found Absolute Antibody’s recombinant anti-CD8 depletion antibody, which was engineered to have Mouse IgG2a constant domains especially to suit in vivo práca. After contacting Absolute Antibody and receiving the antibody within a few days, Daniel’s team established in mouse experiments that the chimeric antibody, administered at standard doses, depleted CD8+ T-cells to below detection limits in blood for at least two months, thus for much longer periods of time than ever previously observed with the standard rat anti-CD8 antibody.

CD8+ T-cell population in mice treated with anti-CD8 antibody clone YTS 169.4 for depletion and isotype controls.
Mouse IgG2a format (Ab00166-2.0) is shown in purple and Rat IgG2b (Ab00166-8.1) is shown in blue. Unpublished data, courtesy and property of the University of Basel, Switzerland.

The resulting data show that the species-matched engineered antibody was able to deplete CD8+ T-cells in mice more completely and for longer than the traditional rat monoclonal. With companies like Absolute Antibody making recombinant engineered antibody options widely available, all researchers planning an in vivo antibody study should consider the impact of antibody species and isotype on their research.


Podporujúce informácie

S1 Text. Supporting information.

Table A. Summary of log rank test results from Fig D in S1 Text. Table B. Demographic and clinical characteristics of participants in the HEATHER trial included in the analyses. Table C. Correlations of PD-1, Tim-3, Lag-3, PD1/Tim-3, PD1/Lag-3 and Tim-3/Lag-3. Table D. Cox Model adjusted for Tim-3, PD-1, Lag-3, baseline CD4 and ART. Fig A. Gating strategy: proportion of the total CD8 T cell population that express PD-1, Tim-3, Lag-3 or CD38. Fig B. Expression of PD-1, Tim-3 and Lag-3 on CD8 T cells in healthy controls and Primary HIV Infection. Fig C. Impact of Tim-3 and Lag-3 expression on CD38 CD8 T cells on clinical outcome. Fig D. Impact of co-expression at baseline on CD8 T cells of PD-1, Tim-3 and Lag-3 on clinical outcome. Fig E. Gating strategy used for the characterisation of PD-1, Tim-3 and Lag-3 on memory subsets. Fig F. Correlation of CD39 expression with PD-1, Lag-3 and Tim-3.


The authors have no conflicts of interest.

This work was supported by the DC-THERA network, by the Cancer Immunology and Immunotherapy Research Project (EU254), by the Institute for Science and Technology (IWT, IWT-TBM 60511 project), and by the University Research Fund (OZR1801). S.D.A. is a Ph.D. student and J.L.A. a postdoctoral fellow of the Fund for Scientific Research Flanders (FWO). The authors thank Dr. Peter Searle (Cancer Research UK Institute for Cancer Studies, University of Birmingham, UK) for providing the 4-1BBL construct and Elsy Vaeremans, Xavier Debaere, Gwenny De Metter, Inge Betz, Abderahim Hbeddou, and Mattias Van den Abeele for excellent technical support. The authors acknowledge Sarah Maenhout for help with Western blot assays and Jean-Marc Lazou (Department of Cell Biology, Vrije Universiteit Brussel) for help with FACS sorting. The authors thank the staff of the Department of Radiotherapy (UZ Brussel) for irradiating cells. The authors are very grateful to the staff of the Department of Internal Medicine (UZ Brussel) and the Department of Internal Medicine II (Erasmus Medical Center, Rotterdam, The Netherlands) for the recruitment of patients and to all patients who willingly participated in this study.

Upozornenie: Vydavateľ nezodpovedá za obsah ani funkčnosť akýchkoľvek podporných informácií dodaných autormi. Akékoľvek otázky (okrem chýbajúceho obsahu) by ste mali smerovať na príslušného autora článku.


Pozri si video: На заводе Биохимик зарегистрировали первый препарат для терапии ВИЧ-инфекции. (Jún 2022).